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微生物多样性-DGGE
     变性梯度凝胶电泳是将DNA置于双重变性条件(温度和变性剂)下进行SDS-PAGE电泳的一种分析方法。当一双链DNA片段通过一变性剂浓度呈梯度增加的凝胶时,此片段迁移至某一点变性剂浓度恰好相当于此段DNA的低熔点区的Tm值,开始解链,而高熔点区仍为双链。这种局部解链的DNA分子迁移率发生改变,从而达到分离的效果。

      然而,一旦温度(或变性剂浓度)达到DNA片段最高的解链区域熔解温度时,DNA片段会完全解链,成为单链DNA分子,此时它们又能在胶中继续迁移。因此,如果不同DNA片段的序列差异发生在最高的解链区域时,这些片段就不能被区分开来。在DNA片段的一端加入一段富含GC的DNA片段(GC夹子:一般30-50个GC碱基对),能够保证DNA片段最高解链区域在GC夹子处,它的高解链温度可以防止DNA片段在DGGE胶中完全解链。

      Tm的改变依赖于DNA序列,加了GC夹子后,DNA片段中基本上每个碱基处的序列差异都能被区分开。因此,理论上DGGE可以检测DNA分子中的任何一种单碱基的替代、移码以及缺失。




 
 
      采用特异性扩增引物扩增特定环境样品中细菌16SrDNA、真菌18SrDNA/ITS或功能基因DNA,通过变性梯度凝胶电泳分析环境样品中微生物菌群落结构;将凝胶电泳条带回收后克隆测序,确定微生物种属关系,获得特定样品中的微生物多样性信息。

      您获得的DGGE数据结果包括:


 
 
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