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细胞凋亡检测服务
        细胞凋亡(apoptosis)一般是指机体细胞在发育过程中或在某些因素作用下,发生的一种程序性细胞死亡(programmed cell death)。细胞凋亡不是一件被动的过程,而是主动过程,它涉及一系列基因的激活、表达以及调控等的作用,它并不是病理条件下,自体损伤的一种现象,而是为更好地适应生存环境而主动争取的一种死亡过程。
        根据细胞凋亡的形态学和生物化学变化,一般常用的检测方法包括:形态学检测,Annexin V 法,线粒体膜势能的检测,DNA 片断化检测,TUNEL 法,Caspase-3 活性的检测,TFAR19 蛋白的表达和细胞定位分析。
        
Tunel法检测细胞凋亡
       TUNEL细胞凋亡检测 (TUNEL Apoptosis Assay) 是一种高灵敏度又快速简便的细胞凋亡检测方法。对于待检测的细胞或组织样品,经过生物素标记和后续的DAB显色等步骤,即可在普通光学显微镜下观察到凋亡细胞。细胞在发生凋亡时,会激活一些DNA内切酶,这些内切酶会切断核小体间的基因组DNA。细胞凋亡时抽提DNA进行电泳检测,可以发现 180-200bp的DNA ladder。
        基因组DNA断裂时,暴露的3'-OH可以在末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)的催化下加上生物素(Biotin)标记的dUTP(Biotin-dUTP),随后和辣根过氧化物酶(HRP)标记的Streptavidin (Streptavidin-HRP)结合,最后在HRP的催化下通过DAB显色来显示凋亡细胞,从而可以通过普通光学显微镜检测到凋亡的细胞。
 
服务内容
       1.     组织切片/细胞爬片
        2.     常规TUNEL检测
        3.     荧光TUNEL试剂盒检测
        4.     数据整理及结果分析
        *根据客户需要对细胞核进行荧光染色
客户须知:
       1.     由客户提供荧光TUNEL检测试剂盒
        2.    本公司保证数据的客观性、准确性,但不保证与客户预期吻合
提供结果:
       1.     成像图片(或按客户需要排列图片,达到可直接发表水平)
        2.     实验详细流程
        3.     原始数据
        4.     标记后(处理后)的样本
样本要求:
       1.     悬浮生长培养细胞的甩片或涂片
        2.     贴壁生长的培养细胞 
        3.     冰冻切片 
        4.     常规石蜡切片
 
Annexin V-FITC/PI流式法检测细胞凋亡
        在正常细胞中,磷脂酰丝氨酸只分布在细胞膜脂质双层的内侧,细胞发生凋亡最早期,膜磷脂酰丝氨酸(PS)由脂膜内侧翻向外侧,这一变化早于细胞皱缩、染色质浓缩、DNA片断化和细胞膜的通透性增加等凋亡现象。Annexin V是一种磷脂结合蛋白,与磷脂酰丝氨酸有高度亲和力,故可通过细胞外侧暴露的磷脂酰丝氨酸与凋亡早期细胞的胞膜结合。因此Annexin V被作为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一种核酸染料,它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和死细胞由于细胞膜通透性的增加,PI能够透过细胞膜而使细胞核染红。因此将Annexin V与PI匹配使用,就可以将处于不同凋亡时期的细胞区分开来。
 
 

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